اشعارات

آثار سيكريتين الوريد على اللغة والسلوك من الأطفال الذين يعان

رد: آثار سيكريتين الوريد على اللغة والسلوك من الأطفال الذين

مستقبلات الجينات سيكريتين الإنسان: منظمة الجينوم وتوصيف المروج
بو كي هوا، رانغو S.M. Fonga، هايدي S.T. كايا، إليسا H.Y. Laua، اللى S.W. Ngana، كالفين U. Cottonb، بيلي K.C. Chowa،،
قسم علم الحيوان، جامعة هونغ كونغ، Pokfulam الطريق، هونج كونج، SAR، جمهورية الصين الشعبية
ب مركز التليف الكيسي، وأقسام طب الأطفال وعلم وظائف الأعضاء والفيزياء الحيوية، جامعة كيس ويسترن ريزيرف، كليفلاند، OH 44106، الولايات المتحدة الأمريكية
http://dx.doi.org/10.1016/S0014-5793 (99) 00864-9، كيف أن يذكر أو الارتباط باستخدام دوى
ضوابط وإعادة طبع
ملخص
سيكريتين هو منظم أقوى من البنكرياس بيكربونات، المنحل بالكهرباء وحجم إفراز. في هذا التقرير، تميزت بتنظيم سيكريتين مستقبلات (HSR) الجينات البشرية بواسطة تداخل استنساخ فج الجيني. يتكون هذا الجين HSR من 13 الإكسونات و 12 الإنترونات مع جميع الجهات المانحة لصق ومواقع متقبل مطابقة للGT / AG حكم الكنسي. بواسطة عابر مراسل المقايسات الجيني، والمروج من النوع البري، تحتوي على 3.0 كيلوبايت من HSR الجين 5 'المنطقة المحيطة، وكان قادرا على دفع 5.8 ± 0.6 و 6.6 ± 0.2 أضعاف (P <0.01) الزيادات في الأنشطة وسيفيراز في البنكرياس قنية- المستمدة PANC-1-1 وBPD الخلايا، على التوالي. بواسطة لاحقة 5 'و 3' تحليل الحذف، تم تحديد العنصر المروج ضمن -408 -158 ل، نسبة إلى رامزة ATG. تم العثور على هذا العنصر المروج ليكون خلية محددة لأنها يمكن أن تقود المراسل التعبير الجيني في PANC-1-1 والخلايا برميل يوميا ولكن ليس في النظام المنسق 262.St، HS 746T وαT3-1 الخلايا. دراسة السيطرة النسخي من سيكريتين الإنسان ومستقبله يجب تسليط الضوء على التطورات المرضية من سرطان البنكرياس ومرض التوحد في المستقبل.

كلمات البحث
سيكريتين؛ سيكريتين مستقبلات؛ دراسة المروج؛ بنية الجينات؛ التوحد
1. مقدمة
تم اكتشاف سيكريتين الأول في عام 1902 من قبل بايليس والزرزور [1]. العمل الرئيسي للسيكريتين هو تحفيز بيكربونات، المنحل بالكهرباء وحجم إفراز البنكرياس من خلايا الظهارية قنية. ولم يبلغ عن الإجراءات الأخرى من سيكريتين بما في ذلك تثبيط إفراغ المعدة والمخرجات حامض [2] و [3]، وتحفيز الكبد تدفق الصفراء [4]، والتحفيز من المخاط، وكذلك بيكربونات والبشرة عامل النمو إفراز من غدد برونر الاثني عشر في [5 ]. وتوسط وظائف سيكريتين عبر تفاعلات معينة مع مستقبلات سطح الخلية. مؤخرا، cDNAs المقابلة على الفئران [6] والإنسان [7]، [8] و [9] وقد اتسمت المستقبلات سيكريتين (SR). مماثلة لأعضاء آخرين في نفس البروتين يقترن G عائلة مستقبلات، وHSR يحتوي على نطاق كبير نسبيا ماء خارج الخلية. وأشير إلى أهمية هذا ectodomain N-محطة في التفاعل يجند حسب النطاق مبادلة التجارب [10] ونهجا جديدا باستخدام ectodomain المؤتلف استعداء وظيفيا مستقبلات من النوع البري [11].

جميع أعضاء عائلة مستقبلات سيكريتين-الجلوكاجون قادرون على الزوجين لع البروتين مما يؤدي إلى إنتاج أحادي فوسفات الأدينوزين الحلقي داخل الخلايا. باستخدام بروتين كيناز ألف (PKA) المانع، H-89، أشير إلى PKA أن تكون مسؤولة إلى حد كبير عن تنفيذ الاستجابات الخلوية على سيكريتين التنشيط [11] و [12]. مؤخرا، تم دراسة إنهاء HSR إشارات آلية ويبدو أن البروتين يقترن G كيناز مستقبلات والفسفرة مستقلة استيعاب مستقبلات كلاهما مهم في الحساسية مستقبلات لحماية الخلايا المستقبلة للالحاملة من التحفيز الزائد [12]، [13]، [ 14] و [15]. ومع ذلك، هذا الحدث الحساسية الحادة هو عكسها وتبعتها عملية إعادة التوعية السريع [12].

وقد اجتذب دراسة سيكريتين الإنسان ومستقبله أكثر من ذلك بكثير الاهتمام في الآونة الأخيرة بسبب المعاملة ممكن من المرضى الذين يعانون من التوحد مع تكرار التسريب في الوريد من سيكريتين [16]. هذا التطبيق الجديد العلاجية المحتملة من سيكريتين يعطي نظرة جديدة تماما في فهم هذا الهرمون التقليدية ومستقبله. فمن الممكن جدا أن سيكريتين هو أيضا نيوروبيبتيدي، وربما يكون التوحد والخلل الجيني التي تنطوي على تحور في هيكل و / أو المروج من سيكريتين الإنسان و / أو سيكريتين جينات مستقبلة. لقد تعيينها سابقا الجين إلى 2q14.1 بواسطة فلوري التهجين في الموقع [17] في، والآن، ونحن التقرير هنا منظمة الجينوم وتوصيف وظيفي من 3 KB 5 'المرافقة المنطقة من الجين HSR.

2. المواد والأساليب
2.1. الفحص الجيني المكتبة
تم فحص مكتبتين الجينوم البشري، HL1067j (Clontech المختبرات، بالو ألتو، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) وLL02NS01 (آي تي ​​سي سي، روكفيل، MD، الولايات المتحدة الأمريكية)، مع إما التحقيق A (1166 BP، BP 249-1414 من [كدنا])، B مسبار (427 شركة بريتيش بتروليوم، BP 108-534 من [كدنا])، مسبار C (301 شركة بريتيش بتروليوم، BP 1-301 من [كدنا])، مسبار D (137 شركة بريتيش بتروليوم، BP 1-137 من [كدنا]) أو التحقيق E (446 BP، 1254 -1699 بي بي من [كدنا]). تم الحصول على تحقيقات B، C و E التي كتبها البلمرة المتسلسل (PCR) التضخيم باستخدام أزواج التمهيدي hSR5 '(CGGGATCCAT GCGTCCCCAC CTGTCGCCGC) وhSR3' (CGGATTTCCA GCTTCAGCAG GTAGGAGTG)، hSG5F (ACGAGGCCGG CCGGAGCCCG GGACCCTGCG) وhSG5R (CTGGCACTGG CTGCTCCGTG CCCAGGTCTC)، أو hSRG1 (GTGGTGGCCG TCCTCTACTG CTTCCTCA) وhSRG2 (ACCCCTGAAC TTCTCTTCCC GAAGAG)، على التوالي. يرد PCR عادة 50 الاشعال بمول، 200 ميكرومتر dNTPs و 5 وحدات البلمرة طق (الحياة تكنولوجيز، وشركة) في المخزن المؤقت المقدمة من قبل الشركة المصنعة. كانت أوقات رد الفعل 1 دقيقة في 94 درجة مئوية، و 58 درجة مئوية و 72 درجة مئوية، على التوالي، لمدة 30 دورات. تم subcloned شظايا PCR في pBluescript SK + (Stratagene، لا جولا، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) لتحليل تسلسل الحمض النووي باستخدام T7 تسلسل عدة (فارماسيا، أوبسالا، السويد). وصفت تحقيقات باستخدام Megaprime مجموعة العلامات الحمض النووي و[α-32P] dATP (أمرشام). تم إجراء الفحص مكتبة أساسا بعد بروتوكول صفها في وقت سابق [7]. تمت تنقية الحمض النووي فج من قبل QIAGEN امدا فج مجموعة (QIAGEN شركة، سانتا كلاريتا، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) وتعرض لرسم الخرائط وتحليل تقييد تسلسل الحمض النووي. وقد تم تحليل تسلسل الحمض النووي من الحيوانات المستنسخة الإيجابية التي DNASIS V 3.6 (هيتاشي، سان برونو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.2. بناء البلازميد
تم subcloned A 3 KB جزء تقييد (PstI) الموافق 5 'المنطقة المنبع من HSR الجين في pBluescript KS + (Stratagene) لإنتاج p42Ab. شيدت التعبير البلازميدات p3039luc وp3039Rluc عن طريق الاستنساخ في KpnI / SstI DNA جزء (-3039 إلى -69 نسبة إلى ATG) في ناقلات مراسل luciferase pGL2-الأساسية (PROMEGA، ماديسون، WI، الولايات المتحدة الأمريكية) في توجهات الأمامية والعكسية، على التوالي . تم الحصول على غيرها 5 'و 3' استنساخ الحذف عن طريق الإفراج عن شظايا تقييد من p3039luc. تم إنشاء عائلة متداخلة من 5 'استنساخ الحذف من p681luc بواسطة نوكلياز خارجية III/S1 نوكلياز الهضم (فارماسيا).

2.3. خلية ثقافة وترنسفكأيشن عابر
وقد نمت جميع الخلايا بما في ذلك PANC-1 (البنكرياس الإنسان قنية سرطان، آي تي ​​سي سي) وBPD-1 (بقري البنكرياس ظهارة القناة) عند 37 درجة مئوية مع نسبة 5٪ CO2 في DMEM تستكمل مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) والمضادات الحيوية (100 U / مل البنسلين، 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين). لفحوصات ترنسفكأيشن عابرة، كانت المصنفة الخلايا على 6 لوحات جيدا (COSTAR 3506 سان دييغو، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) في مناطق ذات كثافة من 1.5 × 105/well. تم إجراء ترنسفكأيشن بعد 40 ساعة باستخدام كوكتيل يحتوي على 1 ميكروغرام بناء المروج-المراسل، 0.5 ميكروغرام PSV-β-غال (PROMEGA) و 5 ميكرولتر كاشف LipofectAMINE (لايف تكنولوجيز، وشركة). وحضنت الخلايا لمدة 7 ساعات قبل إضافة 1 مل DMEM/20٪ FBS. تم إعداد المحللة خلية بعد 48 ساعة من قبل غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني تليها إضافة من تحلل العازلة مراسل (PROMEGA). أجريت وسيفيراز وغالاكتوزيداز المقايسات أساسا كما هو موضح سابقا [18]. لكل دراسة ترنسفكأيشن، تقرر luciferase النشاط وتطبيع على أساس النشاط غالاكتوزيداز. وقد أعد DNA البلازميد لترنسفكأيشن باستخدام QIAGEN ميدي مجموعة (QIAGEN).


http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014579399008649
 
يجب تسجيل الدخول أو التسجيل كي تتمكن من الرد هنا.

عودة
أعلى